如何在-196℃hth体会官方网页版中複蘇細胞

細胞複蘇的原則-快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。MVEhth体会官方网页版

　　一、 實驗前準備：

　　1、將水浴鍋預熱至37℃

　　2、用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超淨工作台台麵。

　　3、在超淨工作台中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等等。

　　二、取出凍存管：

　　1、根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。

　　2、從hth体会官方网页版中取出細胞盒，取出所需的細胞，同時核對管外的編號。

　　三、迅速解凍：

　　1、迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍，並要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化。

　　2、約1-2min後凍存管內液體完全溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超淨台內。

　　四、平衡離心：

　　用架盤天平平衡後，放入離心機中3000r/min 離心3min

　　五、製備細胞懸液：

　　1、吸棄上清液。

　　2、向離心管內加入10ml培養液，吹打製成細胞懸液。

　　六、細胞計數：

　　細胞濃度以5×105/ml為宜。

　　七、培養細胞：

　　將複合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內，將培養瓶放入37℃5%CO2的培養箱內2-4小時(或者24-48小時)後換液繼續培養培養，換液的時間由細胞情況而定。

　　初學者易犯錯誤：

　　1、水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。

　　2、水浴鍋內凍存管太多，導致傳熱不佳，使融化時間延長。

　　3、離心前忘記平衡，導致離心機損壞和細胞丟失。

　　4、一次複蘇細胞過多，忘記更換吸頭和吸管，導致細胞交叉汙染。MVEhth体会官方网页版